ⅠNуклеиновая кислотаiвведение
Нуклеиновая кислота делится на дезоксирибонуклеиновую кислоту (ДНК) и рибонуклеиновую кислоту (РНК), среди которых РНК делится на рибосомальную РНК (рРНК), информационную РНК (мРНК) и транспортную РНК (тРНК) в соответствии с ее различными функциями.ДНК преимущественно сосредоточена в ядре, митохондриях и хлороформе, тогда как РНК преимущественно распределена в цитоплазме.Являясь материальной основой экспрессии генов, экстракция нуклеиновых кислот играет чрезвычайно важную роль в исследованиях молекулярной биологии и клинической молекулярной диагностике.Концентрация и чистота экстракции нуклеиновой кислоты будут напрямую влиять на последующую ПЦР, секвенирование, конструирование векторов, ферментативное расщепление и другие эксперименты.
Ⅱ Метод экстракции и очистки нуклеиновой кислоты
① Метод экстракции фенолом/хлороформом
Экстракция фенолом/хлороформом — это классический метод экстракции ДНК, в котором для обработки образцов в основном используются два разных органических растворителя, при этом нуклеиновая кислота на основе ДНК растворяется в водной фазе, липиды в органической фазе и белки между двумя фазами.Этот метод имеет преимущества низкой стоимости, высокой чистоты и хорошего эффекта.Недостатками являются сложная эксплуатация и длительное время работы.
② Метод Тризола
Метод Тризола является классическим методом выделения РНК.Метод Тризол разделяется на водную фазу и органическую фазу после центрифугирования с хлороформом, при котором РНК растворяется в водной фазе, водную фазу переносят в новую ЭП-пробирку, после добавления изопропанола получают осадок, а затем проводят очистку этанолом.Этот метод подходит для экстракции РНК из тканей, клеток и бактерий животных.
③ Метод очистки центробежной колонки.
Метод очистки центрифужной колонки позволяет адсорбировать ДНК специфически с помощью специальных адсорбционных материалов с кремниевой матрицей, в то время как РНК и белок могут проходить плавно, а затем использовать высокую соль с низким pH для объединения нуклеиновой кислоты, элюирование с низким содержанием соли и высоким значением pH для разделения и очистки нуклеиновой кислоты.Преимуществами являются высокая концентрация очистки, высокая стабильность, отсутствие необходимости в органических растворителях и низкая стоимость.Недостаток заключается в том, что его необходимо центрифугировать поэтапно, требуется больше этапов операции.
④ Метод магнитных шариков
Метод магнитных шариков заключается в разделении образца клеточной ткани через лизат, высвобождении нуклеиновой кислоты из образца, а затем молекулы нуклеиновой кислоты специфически адсорбируются на поверхности магнитных шариков, в то время как примеси, такие как белки и сахара, остаются в жидкость.В результате этапов расщепления клеточной ткани, связывания магнитных шариков с нуклеиновой кислотой, отмывания нуклеиновой кислоты, элюирования нуклеиновой кислоты и т. д. в конечном итоге получается чистая нуклеиновая кислота.Преимуществами являются простота эксплуатации и кратковременное использование без необходимости ступенчатого центрифугирования.Он имеет низкие технические требования и может осуществлять автоматическую и массовую работу.Особое сочетание магнитных шариков и нуклеиновой кислоты обеспечивает высокую концентрацию и чистоту экстрагированной нуклеиновой кислоты.Недостатком является то, что текущая рыночная цена относительно высока.
⑤ Другие методы
Помимо четырех вышеуказанных методов, существуют кипящий крекинг, метод с концентрированной солью, метод с анионным моющим средством, ультразвуковой метод, ферментативный метод и т. д.
Ⅲ Тип экстракции нуклеиновой кислоты
Foregene предлагает ведущую в мире платформу прямой ПЦР, платформу для выделения РНК с двумя колонками (только ДНК + только РНК).Основная продукция включает наборы для выделения ДНК/РНК, реагенты для ПЦР и прямой ПЦР, серию молекулярных лабораторных реагентов.
① Экстракция тотальной РНК
Образцы для экстракции тотальной РНК включают кровь, клетки, ткани животных, растения, вирусы и т. д. Высокая чистота и высокая концентрация тотальной РНК может быть получена посредством экстракции тотальной РНК, которую можно использовать в RT-PCR, чип-анализе, трансляции in vitro, молекулярное клонирование, дот-блоттинг и другие эксперименты.
Связанные с ФоредженомНаборы для выделения РНК
Набор для выделения тотальной РНК животных--Быстро и эффективно извлекайте тотальную РНК высокой чистоты и качества из различных тканей животных.
Набор для выделения клеточной тотальной РНК--Высокоочищенную и качественную тотальную РНК можно получить из различных культивируемых клеток за 11 минут.
Набор для выделения тотальной РНК растений--Быстро извлекайте высококачественную тотальную РНК из образцов растений с низким содержанием полисахаридов и полифенолов.
Набор для выделения вирусной РНК--Быстро изолируйте и очищайте вирусную РНК из таких образцов, как плазма, сыворотка, бесклеточные жидкости организма и супернатанты клеточных культур.
② Экстракция геномной ДНК
Образцы экстракции геномной ДНК включают почву, фекалии, кровь, клетки, ткани животных, растения, вирусы и т. д. Экстракцию геномной ДНК можно использовать при ферментативном расщеплении, создании библиотеки ДНК, ПЦР, приготовлении антител, вестерн-блот-гибридизационной анализе, генном чипе, высокой -пропускное секвенирование и другие эксперименты.
Связанные с ФоредженомНаборы для выделения ДНК
Набор для выделения ДНК тканей животных--Быстрое извлечение и очистка геномной ДНК из нескольких источников, таких как ткани животных, клетки и т. д.
Миди-набор ДНК крови (1–5 мл)--Быстро очистите высококачественную геномную ДНК из антикоагулянтной крови (1-5 мл).
Буккальный мазок/карта FTA, набор для выделения ДНК--Быстро очистите высококачественную геномную ДНК из буккальных мазков/образцов карт FTA.
Набор для выделения ДНК растений--Быстро очистить и получить высококачественную геномную ДНК из образцов растений (включая образцы полисахаридов и полифенолов растений)
③ Экстракция плазмиды
Плазмида — это разновидность кольцевой небольшой молекулы ДНК в клетках, которая является обычным носителем рекомбинации ДНК.Метод экстракции плазмиды заключается в удалении РНК, отделении плазмиды от бактериальной геномной ДНК и удалении белка и других примесей с получением относительно чистой плазмиды.
Общий мини-набор плазмид--Быстро очистите высококачественную плазмидную ДНК из трансформированных бактерий для рутинных экспериментов по молекулярной биологии, таких как трансформация и ферментативное расщепление.
④ Другие типы экстракции, экстракция микроРНК и т. д.
Набор для выделения микроРНК животных--Быстро и эффективно извлекать небольшие фрагменты РНК из 20-200 нт микроРНК, миРНК, мяРНК из различных тканей и клеток животных.
Ⅳ Требования к результату экстракции и очистки нуклеиновой кислотыs
① Обеспечить целостность первичной структуры нуклеиновой кислоты.
② Уменьшите взаимодействие белков, сахаров, липидов и других макромолекул.
③ В образцах нуклеиновых кислот не должно быть органических растворителей или высоких концентраций ионов металлов, которые могут ингибировать фермент.
④ При выделении ДНК необходимо исключить загрязнение РНК и другими нуклеиновыми кислотами, и наоборот.
Время публикации: 24 ноября 2022 г.
